定點突變試劑盒產(chǎn)品介紹
    基因定點突變是一種對質(zhì)粒DNA序列上的指定堿基進行體外定點替換、插入或缺失等序列改變的基因操作技術(shù)，在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能以及DNA表達調(diào)控研究中是一種非常重要的技術(shù)?；蚨c突變試劑盒在不需要特殊載體、不需要T4 DNA 連接酶、不需要亞克隆的條件下可以對指定堿基進行突變。試劑盒使用了具有快速擴增性、超高保真性和強大擴增能力特點的Xerox DNA聚合酶，只需以甲基化質(zhì)粒為模板進行一次PCR擴增、一次酶切消化和一次轉(zhuǎn)化就可以在**之內(nèi)完成基因突變過程，整個過程非常簡單。該試劑盒也可以同時對多個位點進行突變。 
定點突變試劑盒產(chǎn)品特點
    1. 采用完全重疊引物設(shè)計，使PCR呈指數(shù)擴增，擴增產(chǎn)物凝膠電泳可見；擴增產(chǎn)物為環(huán)狀，易于轉(zhuǎn)化。
    2. 同類型產(chǎn)品只采用內(nèi)切酶或感受態(tài)細胞降解非突變型質(zhì)粒模板，而該試劑盒結(jié)合了上述兩種方法，從而更有效地降解甲基化的質(zhì)粒模板，突
      變效率更高，對照突變效率可達90%。
    3. 試劑盒中搭配高保真的2× Gold Pfu Mix，擴增速度和保真性大大提高，Mix的形式只需加入引物和模板，使操作更簡單。 
定點突變試劑盒產(chǎn)品儲存
    BMXL10-Gold Competent Cell -70儲存，其他－20 ℃ 保存。 

引物設(shè)計

    1. 找到需要突變的堿基位點，在突變點兩側(cè)各15-20bp范圍內(nèi)設(shè)計一對引物，兩條引物中都包含要突變成的堿基。

    2. 引物長度一般控制在25-45bp，兩條引物完全匹配區(qū)大約15-20bp，非匹配區(qū)至少10bp。兩條引物控制Tm值大于65℃，GC含量控制在40%以

       上。

    3. *好將突變位點設(shè)計在兩條引物完全匹配區(qū)的中心位置，以免突變位點脫落。

定點突變試劑盒適用范圍

    甲基化質(zhì)粒中核苷酸德突變

質(zhì)控檢測

    利用Control plasmid和Control primer檢驗突變效率，在含氨芐的平板上進行藍白斑篩選，如突變成功菌落呈藍色。